提起細胞培養,相信很多老師都遇到過(guò)培養液中的“小黑點(diǎn)",因無(wú)法確定它的身份而頭痛不已。本期細胞學(xué)堂將為大家揭秘這些黑點(diǎn)究竟是什么,幫助您快速上手開(kāi)展實(shí)驗。
01
血清沉淀
血清在融解過(guò)程中會(huì )產(chǎn)生大量的析出物,呈現出小顆粒樣的東西,甚至呈纖維樣,這是由于血清融解后導致的蛋白、鹽類(lèi)物質(zhì)的析出。
血清融解時(shí)混勻 血清靜置融解不混勻,出現黑點(diǎn)
顯微鏡下的血清沉淀物
影響因素
通常血清析出物的多少與融解方法有關(guān)。通過(guò)4℃冰箱解凍和溶解過(guò)程持續搖晃混勻,可以有效避免沉淀產(chǎn)生,而37℃靜置混勻則會(huì )有較多沉淀物析出。
處理方法
血清沉淀產(chǎn)生后應離心去除部分沉淀,否則在培養細胞時(shí)會(huì )看到較多黑點(diǎn)和雜質(zhì)類(lèi)物質(zhì),影響判斷。
02
細胞碎片或者分泌物
在細胞代謝過(guò)程中,細胞凋亡后會(huì )產(chǎn)生一些分泌物的沉積和碎片物質(zhì),在顯微鏡下呈黑點(diǎn)狀。
顯微鏡下的細胞碎片及分泌物
特征
①
細胞碎片大小不均一,會(huì )隨著(zhù)培養時(shí)間少量增多,但是不會(huì )呈倍增的趨勢增多;
②
細胞狀態(tài)差時(shí)碎片會(huì )較多,狀態(tài)變好后黑點(diǎn)減少;
③
細胞分泌物情況根據細胞有區別,有的細胞不產(chǎn)生分泌物,有的細胞會(huì )有較多的分泌物,往往是不影響細胞形態(tài)和增殖速度。
03
外源微生物污染
當細胞被支原體、黑膠蟲(chóng)或者細菌污染時(shí),往往也會(huì )產(chǎn)生很多小黑點(diǎn),尤其是細菌污染的情況出現時(shí),這些小黑點(diǎn)甚至會(huì )導致培養液渾濁。
細胞支原體污染,黑點(diǎn)較多
細胞加入支原體清除試劑第二天,黑點(diǎn)顯著(zhù)變少
如何區分是否為污染?
1
外源微生物污染
支原體和黑膠蟲(chóng)污染一般表現為黑點(diǎn)增多并伴隨細胞生長(cháng)速度變慢、死細胞增多等現象,通常加入對應清除試劑后細胞狀態(tài)會(huì )有顯著(zhù)改善。
2
細胞分泌物/細胞碎片
細胞分泌物和細胞碎片則不會(huì )因為加入清除試劑后而改善,會(huì )持續存在且不影響細胞增長(cháng)。
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